复方薤白胶囊对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠ET、TNFα含量的影响(一)

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作者：孙菊光，奚肇庆，姜静，朱萱萱，洪建军，蒋萌，邹建东，徐艳，甘咏梅

[摘要]目的：探讨复方薤白胶囊对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压大鼠血浆中内皮素(ET)、肿瘤坏死因子α(TNFα)含量的影响。方法：SD 大鼠60只，随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、复方薤白胶囊高剂量组和复方薤白胶囊低剂量组。采用MCT进行一次性腹腔注射（按60mg?kg-1）造模，22d后测定平均肺动脉压、平均右心室压以及血浆中ET、TNFα的含量，并观察肺小动脉及右心室病理变化。结果：模型组平均肺动脉压、右心室压以及血浆中ET、TNFα含量明显高于正常对照组（P＜0.01）。其余各组平均肺动脉压、右心室压以及血浆中ET、TNFα含量明显低于模型组（P＜0.05或P＜0.01），且复方薤白胶囊高、低剂量组优于卡托普利组。结论：复方薤白胶囊能有效降低MCT诱导肺动脉高压大鼠的肺动脉压，可能的机制是抑制TNFα、ET产生，减轻MCT引起的炎性细胞浸润，改善肺小动脉及右心室重构。提示复方薤白胶囊将是防治肺动脉高压很有前途的中药，值得进一步研究。

[关键词]复方薤白胶囊；野百合碱；肺动脉高压；内皮素；肿瘤坏死因子

肺动脉高压（pulmonary hypertension，PH）是慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）引起慢性肺源性心脏病的中心环节[1]。阐明PH的形成机制以及寻求理想的防治PH药物一直是COPD、肺源性心脏病防治研究中的重要研究课题〔2〕。近年来研究发现，肺血管内皮代谢的变化及体液因子在肺动脉高压的发生、发展中有重要作用[37]。本实验采用野百合碱（MCT）诱导PH大鼠模型，研究复方薤白胶囊(以下简称FFXBC)对MCT诱导的PH大鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNFα）和内皮素（ET）含量的影响，以探讨FFXBC防治COPD、PH的可能机制。

1 材料与方法

1. 1 实验动物和药品健康SD大鼠60只，雄性，体重130～175g，鼠龄6～8周，由南京青龙山动物饲养厂提供，证号SCXK 2001 0007。FFXBC由江苏省中医院药剂科制剂部生产，卡托普利片由中美施贵宝制药有限公司生产，0.9%的NaCl溶液由南京小营制药厂生产，戊巴比妥钠由北京通县育才精细化工厂生产，肝素由江苏省万邦升化医药股份有限公司生产。

1.2 试剂与仪器MCT，美国Sigma公司生产，批号43606091；TNFα ELISA试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；ET ELISA试剂盒由北京晶美生物工程有限公司提供；右心导管:聚乙烯心导管内径0.6mm，外径0.9mm，购于中国医学科学院基础医学院研究所；RM 6000多导生理仪购于日本光电公司。

1.3 方法

1.3.1 分组 健康SD大鼠60只，适应性饲养3d后根据体重由轻到重编号，借助SAS统计分析系统PROC PLAN程序进行随机分组：正常对照组10只，模型组14只，卡托普利组、FFXBC高剂量组、FFXBC低剂量组各12只。

1.3.2 造模 模型组、卡托普利组、FFXBC高剂量组、FFXBC低剂量组大鼠分别予一次性腹腔注射2%MCT（剂量60mg?kg-1）复制PH大鼠模型，正常对照组一次性腹腔注射等量生理盐水。

1.3.3 给药方法及剂量 于造模第2天开始给药。参照《中药药理研究方法》经灌胃器灌胃给药，各组药物剂量：卡托普利组为4.16mg?kg-1?d-1。FFXBC高剂量组为1.32g?kg-1?d-1，FFXBC低剂量组为0.666g?kg-1?d-1。以上各组药物按相应的药物剂量均配成1ml?（100g）-1溶液，每天1次灌胃；模型组予1ml?（100g）-1生理盐水灌胃，1 次?d-1。

1.3.4 平均肺动脉压(mPAP)和平均右心室压(mRVP)测定 每组按随机数字表法取6～8只大鼠测量肺动脉压，用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，按孙波等[8]方法将一充盈1%肝素的右心导管从右颈外静脉经上腔静脉、右心房、右心室插到肺动脉，导管另一端连接生理多导仪，并连接P300型压力传感器，根据生理多导仪所显示的压力波型变化判断导管的位置。分别记录10、30、60min时的肺动脉压和右心室压，取其平均值为mPAP和mRVP。

1.3.5 ET、TNFα的含量测定 每只肺动脉压测量完毕后的大鼠行颈动脉或心脏穿刺抽血，剩余的大鼠均进行眼眶取血3ml入备有胰酞酶的试管中，应用放射免疫法测定血浆中ET、TNFα的含量(按试剂盒的要求操作)。

1.3.6 病理学检查 取血后立即处死大鼠，剖开胸腔取出心脏、肺脏，取右肺下叶放入10%福尔马林中固定1周，梯度乙醇脱水，取相同部位肺组织、右心室制成标本，石蜡包埋，常规切片，苏木素伊红染色，光学显微镜下观察右心室厚度、细胞形态、肺组织和肺小动脉形态学改变；每组取8只进行病理学检查。

1.4 统计学处理实验数据用x-±s表示，使用SPSS 13.0统计软件，用成组资料方差齐性检验，在此基础上进行多重t检验及两组比较t检验比较多组和两组之间的差异。

2 结 果

2.1 各组mPAP、mRVP测定结果实验结果表明：正常对照组mPAP为（16.37±2.10）mmHg （1mmHg=0.133kPa），mRVP为(35.04±2.96) mmHg，均在正常范围。模型组mPAP为(36.94±4.76) mmHg，mRVP为（36.94±4.76） mmHg，显著高于正常组，达到并超过PH诊断标准，造模成功，两组比较差异有极显著意义（P＜ 0.01）。卡托普利组mPAP、mRVP分别为（31.33±2.35）mmHg、（59.83±3.36） mmHg；FFXBC高、低剂量组mPAP分别为（26.16±2.75）、（27.94± 2.76） mmHg，mRVP分别为（52.5±2.42）、（61.23±4.23） mmHg。卡托普利组，FFXBC高、低剂量组与模型组相比，mPAP、mRVP显著降低，差异具有显著性意义（P＜ 0.01、P＜ 0.05），以FFXBC高、低剂量组mPAP降低更显著。说明FFXBC具有降低MCT诱导HP大鼠肺动脉压作用（表1）。表1 各组大鼠mPAP、mRVP测定结果（略）

2.2 各组大鼠血浆ET含量测定结果结果显示：模型组血浆ET含量较正常组明显升高，差异具有极显著性（P＜ 0.001），卡托普利组、FFXBC高剂量组、FFXBC低剂量组血浆ET含量比模型组显著降低，差异具有极显著性（P＜ 0.01）。实验结果表明，卡托普利、FFXBC高剂量、FFXBC低剂量均能降低MCT诱导PH大鼠血浆中ET含量，且以FFXBC高剂量组ET降低更显著（表2）。表2 各组大鼠ET含量测定结果（略）