银杏外种皮多糖的免疫活性研究(一)
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作者：仰榴青 茆广华 吴向阳 范群艳 朱小宦
【摘要】 目的研究脱蛋白和未脱蛋白银杏外种皮粗多糖（GBEP）对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用。方法采用药物方法建立免疫抑制小鼠动物模型，利用腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、血清溶血素抗体生成实验及脏器系数的变化，研究银杏外种皮粗多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。结果银杏外种皮粗多糖可增强免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素抗体水平以及能对抗环磷酰胺引起的脾脏萎缩。结论 银杏外种皮粗多糖具有增强小鼠免疫功能的作用，脱蛋白粗多糖的免疫活性稍好于未脱蛋白多糖。
【关键词】 银杏外种皮 多糖 环磷酰胺 免疫调节
Abstract：ObjectiveTo study immune regulatory activity of the crude polysaharides with or without protein from Ginkgo biloba Sarcotesta in immune depressive mice. MethodsThe model of immune depressive mice was established with cyclophosphamide.The function of macrophage in abdominal activity was measured. Spectrophotometric determination was adopted to eva luate the ability of antibody producing cell. The index of immune an was used to observe the changes of immune an's weight. ResultsIt showed the GBEP could enhance mouse macrophage to swallow chicken erythrocytes，significantly enhanced the content of haemolysin in mouse body and significantly increased spleen index in immuno suppression mice.ConclusionGBEP can enhance immune function of immune deficient mice, and the crude polysaharides without protein has much better immune activity than that with protein.
Key words：Ginkgo biloba Sarcotesta ； Polysaharide； Cyclophosphamide； Immune adjustability
植物活性多糖具有多种重要的生理功能，主要有诱导体内免疫物质产生、提高机体的免疫作用、抑制肿瘤的生长和扩散、降血糖和降血脂等作用。近年来研究表明，银杏外种皮未脱蛋白粗多糖具有杀死肿瘤细胞、增加SOD的形成、提高机体免疫细胞活性和增强机体免疫功能等作用〔1～4〕，但是关于脱蛋白银杏外种皮多糖的活性研究未见报道。本文研究了银杏外种皮粗多糖和脱蛋白多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响，以期为银杏外种皮多糖的研究开发提供科学理论依据。
1 器材
1.1 仪器贝克曼DU640型紫外分光光度计，美国贝克曼库尔特公司；隔水式电热水浴箱，杭州蓝天化验仪器厂；BH-2型OLYMPUS显微镜，日本奥林巴斯；蔡氏荧光显微镜，德国蔡氏公司。
1.2 材料与试剂银杏外种皮未脱蛋白粗多糖，用GBEP-1表示，多糖含量为38.49%；脱蛋白银杏外种皮粗多糖，用GBEP-2表示，多糖含量为42.80%，两者均为本实验室制备；小鼠（清洁级KM小鼠），购于上海斯莱克实验动物有限责任公司, 合格证号:SCXK（沪）2002-0010号,饲养环境为清洁级，合格证号:SYXK（苏）2002-0007；环磷酰胺粉剂（CTX），江苏恒瑞医药股份有限公司；黄芪注射液，成都地奥九泓制药厂；生理盐水（氯化钠注射液），南京小营制药厂；肝素钠注射液，江苏万邦生化医药股份有限公司；姬姆萨染液，南京建成生物工程研究所。
5%鸡红细胞悬液：由市售肉鸡采血约10 ml，以肝素生理盐水抗凝，再按1∶1加入注射用0.9% NaCl溶液，充分混匀洗涤后，3 000 r/min离心15 min，弃去上清液，余下的红细胞再洗涤2～3次。取洗净离心后的红细胞4 ml，用0.9% NaCl溶液配制成5%浓度，现配现用〔5～7〕。10%补体：取5只不同窝的豚鼠血，分离并合并血清，用生理盐水将血清配成10%浓度保存备用。
2 方法
2.1 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验 取小鼠70只，体重18～22 g，随机分为7组，每组10只，♀♂各半，分别为正常组和CTX模型组（蒸馏水20 ml/kg），阳性药黄芪注射液组（0.1 ml/只），GBEP-1大、小剂量组（300，100 mg/kg），GBEP-2大、小剂量组（300，100 mg/kg）。除阳性药组（肌肉注射）外，各组动物灌胃（ig）给药，给药剂量均为20 ml/kg，每日ig 1次，连续给药7 d，第5天除正常对照组外，每组动物腹腔注射CTX 40 mg/kg(0.1 ml/10 g),第6天各重复注射1次。于最后1次给药后1 h，每鼠腹腔注射5% 鸡红细胞混悬液0.5 ml/只，给鸡红细胞后2 h，处死小鼠。按文献〔5，6〕方法测腹腔巨噬细胞吞噬功能，按如下公式计算得吞噬百分率和吞噬指数。