湖北地黄多糖超声波提取工艺条件及含量测定研究(一)

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作者：田春莲， 廖博儒 ，陈建华， 姚玉红， 曾凤

【关键词】 超声波提取；,,多糖；,,湖北地黄

　　摘要：目的建立超声波提取湖北地黄多糖的最佳工艺和测定湖北地黄各部分中多糖的含量。方法对超声波提取湖北地黄多糖的条件进行了研究并用蒽酮-硫酸法测定了湖北地黄各部分的多糖含量。结果由正交实验得出超声波提取的最佳条件为：湖北地黄与水的质量比为1∶40，提取温度为40℃，提取时间为30 min。采用蒽酮-硫酸法于624 nm比色，得湖北地黄中各部分多糖含量为：根、茎、叶分别为15.74%，8.36%，4.21%。结论湖北地黄的多糖依据不同提取方法、不同部位含量有较大差异。

　　关键词：超声波提取； 多糖； 湖北地黄

　　Extraction Technology by Ultrasonic Wave and Content Determination of the Polysaharide from Rehmannia glutinosa Libosch. in Hubei Province

　　AbstractObjectiveTo establish the optimum process of the polysaharides extraction in seeds of Rehmannia glutinosa Libosch. in Hubei province by ultrasonic wave technology and content determination of polysaharides.MethodsThe extraction conditions with ultrasonic wave were studied and the contents of polysaharides were determined by the anthrone-H2SO4 colorimetric method.ResultsThe optimum process of the technology was abtained through orthogonal test:the ratio of〔S〕/〔L〕 was 1∶40, the extraction temperature was at 40℃ and the extraction time was 30 min. The contents of the polysaharides were determined by anthrone-H2SO4 colorimetric method (λ=624 nm), and the contents from root, stem and leaf were 15.74%, 8.36%, 4.21% respectively.ConclusionThe content of the polysaharides in Rehmannia glutinosa Libosch.of Hubei province were different with different extraction mothed and in different part.

　　Key words：Extraction by ultrasonic wave； Polysaharide; Rehmannia glutinosa Libosch. in hubei province

　　地黄是玄参科植物地黄Rehnannia glutinosch Libos.的地茎〔1〕。为常用中药，始载于《神农本草经》列为上品。鲜地黄性寒、味甘苦，能清热生津，凉血止血、养阴。熟地黄性微温、味甘，能滋阴补血、益津填髓，用于肝肾阴虚，月经不调等症，还具有抗肝瘤、抗病毒、增强免疫功能的效果，其中地黄多糖是一种有效的免疫调节剂，具有抗肝瘤、抗病毒、抗衰老等功效〔2〕。目前国内外主要对于地黄的化学成分、地黄的主要有效成分的药理作用进行研究〔3〕，对怀地黄的多糖提取也有过研究〔4〕，但对于湖北地黄的多糖提取特别是超声波提取还未见报道，因此本文对湖北地黄多糖的超声波提取进行研究，为深度开发湖北地黄这一资源提供依据。

　　1 器材与方法

　　1.1 器材

　　1.1.1 材料 湖北地黄于200506采自张家界市永定区后坪镇，洗净，于60℃烘干，粉碎（过40目筛），贮藏备用。

　　1.1.2 仪器UV160紫外-可见分光光度计（日本岛津）、B8200-J4超声波（日本岛津）、旋转蒸发仪等。

　　1.1.3 试剂石油醚（60～90℃）、95%乙醇、乙醚、丙酮、蒽酮、硫酸、葡萄糖等均为分析纯。

　　1.2 方法

　　1.2.1 标准曲线的制备〔3〕精密称取0.100 0 g葡萄糖（105℃烘干至恒重）置于100 ml容量瓶中，稀释10倍后得标准溶液。分别吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml标准溶液于试管中，加蒸馏水补至1 ml，冰浴，迅速加入4.0 ml蒽酮-浓硫酸试剂，摇匀、冷却，静置5 min后，于紫外分光光度计624 nm处测定吸光值。以浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程。

　　1.2.2 单因素实验

　　1.2.2.1 料液比的选择称取0.500 g经石油醚、乙醚、乙醇回流处理的湖北地黄叶15份，分别按1∶20，1∶30，1∶40，1∶50，1∶60的料液比加入水，于超声波50℃提取50 min，过滤，定容至100 ml，备测。

　　1.2.2.2 提取时间的选择称取0.500 g经石油醚、乙醚、乙醇回流处理的湖北地黄叶15份加入20 ml水，于超声波50℃分别提取10，20，30，40，50，60 min，过滤、定容至100 ml，备测。

　　1.2.2.3 提取温度的选择称取0.500 g经石油醚、乙醚、乙醇回流处理的湖北地黄叶15份加入20 ml水，于超声波分别在30，40，50，60，70℃提取30 min，过滤、定容至100 ml，备测。

　　1.2.3 湖北地黄多糖提取的最佳组合的选择在单因素实验基础上，选择温度（A）、时间（B）、料液比（C）设计正交，本文选用L9（34）正交表进行实验（见表1），进一步探索最佳提取参数。

　　表1 因素水平表（略）

　　1.2.4 湖北地黄根、茎、叶中多糖含量的比较在最佳提取条件下，对湖北地黄根、茎、叶进行超声波提取，并进行多糖含量的比较。

　　2 结果

　　2.1 葡萄糖标准曲线根据2.2得出回归方程为 y=0.008 4 x+0.005 1(r=0.999 5)。结果见图1。

　　图1 葡萄糖标准曲线（略）

　　图2 料液比对湖北地黄多糖含量的影响（略）

　　2.2 料液比对湖北地黄多糖含量的影响由图2可看出：料液比在1∶20~1∶50之间，从1∶20～1∶40多糖含量随料液比的增加而增加，料液比为1∶40时含量最高为5.385%，而当料液比为1∶40～1∶50时，提取的多糖含量随料液比的增大趋于稳定。