夜热清颗粒中丹皮酚的稳定性研究(一)

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作者：张蜀，邓红，谢小燕，林华庆，余楚钦

【摘要】 　　目的 研究提高夜热清颗粒中丹皮酚稳定性的处方工艺。方法采用饱和水溶液法将丹皮酚制成β?环糊精包合物，并用正交实验法进行处方工艺筛选。结果 筛选出丹皮酚最佳包合工艺是:丹皮酚与β?环糊精的比例为1∶12，包合温度为50℃，包合时间为1.0 h。结论制成β?环糊精包合物后夜热清颗粒中丹皮酚的稳定性得到较大提高。

【关键词】 夜热清颗粒 丹皮酚 β 环糊精包合物 饱和水溶液法 稳定性

　　Abstract：ObjectiveTo study the preparation and processing technology in order to improve the stability of paeonol in Ye Re Qing Granules.MethodsThe paeonol -β-CD plex was prepared using a saturated solution method and orthogonal method was used to screen the technological process.Results The optimum inclusion condition of paeonol was paeonol : β?CD in proportion as 1∶12, keeping temperature at 50 ℃ for 1.0 h. ConclusionThe stability of paeonol in YeReQing granules can be significantly improved after being made to paeonol ?β?CD plex .

　　Key words：Ye Re Qing Granules; Paeonol； β?CD inclusion； Saturated water solution method； Stability

　　夜热清颗粒剂是六类新药，由牡丹皮、青蒿、葛根、知母等中药组成，用于感冒后期低热不退或夜热早凉，术后发热等症。其中牡丹皮是一味主要中药。牡丹皮为毛茛科植物芍药属牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮，是临床常用的中药之一，具有抗炎、抗菌、调节心血管系统、调节免疫功能、保肝等作用〔1〕；其中丹皮酚(Paeonol) 是主要活性成分,现代医学研究证明其具有抑菌抗炎、镇痛、解热、解痉、抗过敏、活血、化淤、增强免疫功能等作用〔2〕。丹皮酚的挥发性强、水溶性差〔3〕，直接与其他药物一起制成颗粒剂时易挥发影响药品疗效。夜热清颗粒剂的原制备工艺为取药材浸膏制得颗粒后，将单独提取得到的丹皮酚溶于无水乙醇中，均匀喷入干燥颗粒中，密闭使吸收，混合均匀，晾干，即得。稳定性实验表明，原工艺制备的夜热清颗粒剂中丹皮酚含量降低较快，因此，需研究新的制备工艺，提高丹皮酚的稳定性。β?环糊精（β?CD)具有独特的分子结构，药物经β?CD包合后，仍保留原有的化学性质，在体内经渗透和扩散作用被溶出而发挥药效。将中药制成β?CD包合物能使药物稳定、抑制其挥发和升华、增加其溶解度等〔4〕。本研究采用β?CD以饱和水溶液法对丹皮酚进行包合，再将包合物与干浸膏粉及辅料制成的颗粒混合，对影响包合的诸因素进行考察，筛选优化包合工艺，并对采用新旧工艺制得的夜热清颗粒进行了稳定性实验对比。

　　1 仪器与试药

　　UV1101型紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）；RCT basic恒温磁力搅拌器（IKA）；KQ?100型超声波清洗器（昆明市超声仪器有限公司）；丹皮酚原料（自制，含量为98.0%）；β?CD（山东曲阜天利药用辅料公司，批号20060701）；丹皮酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号110708?200505)；乙醇、无水乙醚、石油醚Ⅱ等试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 丹皮酚含量测定

　　2.1.1 紫外吸收波长确定〔5〕取干燥至恒重的丹皮酚对照品适量，精密称定。用无水乙醇制成浓度为2.52 μg・ml-1的对照品溶液，以无水乙醇为空白，在200～400 nm波长范围内进行扫描，发现在274 nm波长处有最大吸收，因此选定274 nm为丹皮酚的测定波长。

　　2.1.2 专属性实验称取10 mg β? CD置20 ml量瓶中加入适量的无水乙醇，振摇，定容，过滤，取1 ml续滤液于20 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，为β?CD的无水乙醇提取液。以无水乙醇为空白，在200～400 nm波长范围内扫描，β?CD的无水乙醇提取液在274 nm波长处无吸收，对丹皮酚的测定无干扰，说明本法专属性好。

　　2.1.3 标准曲线绘制将丹皮酚对照品配制成质量浓度1.26～7.56 μg・ml-1的系列溶液，以无水乙醇为空白，在274 nm波长处测定吸光度，以吸光度对浓度回归得回归方程：Y＝0.092 4X－0.007 2 ，相关系数r＝0.999 8。说明丹皮酚质量浓度在1.26～7.56 μg・ml-1范围内与吸光度线性关系良好。

　　2.1.4 稳定性实验取浓度为5.475 μg.ml-1的供试品溶液于0，1，2，4，8，24 h测定丹皮酚的吸光度，结果吸光度的RSD=0.66％，说明样品在24 h内稳定。

　　2.1.5 精密度实验取浓度为5.04 μg・ml-1的丹皮酚对照品溶液，在274 nm处连续测定6次，测定丹皮酚吸光度，RSD=0.11％，说明仪器精密度良好。

　　2.1.6 含量测定方法及计算

　　取丹皮酚包合物约10 mg，精密称定，置20 ml量瓶中，加适量无水乙醇，超声15 min，用无水乙醇稀释至刻度，过滤，取续滤液1 ml至10 ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，以无水乙醇为空白，在274 nm波长处测定吸光度，用标准曲线法进行含量测定。按照下列公式计算包合物的包合率与收得率。

　　包合率（％）=包合物中丹皮酚质量/丹皮酚投入量×100％

　　收得率（％）=包合物的质量/(丹皮酚投入量+β?CD投入量)×100％

　　2.2 包合物的制备

　　2.2.1 制备方法〔6〕

　　将一定量的β?CD置150 ml的具塞三角瓶中，加入50 ml蒸馏水，水浴加热溶解制成饱和溶液，在设定的包合温度下用磁力搅拌器（500 r・min-1）搅拌。精密称取0.5 g丹皮酚，用3 ml无水乙醇溶解，用滴管将丹皮酚溶液注入β?CD饱和水溶液中，恒温搅拌至规定时间，取出，放冷，置冰箱中冷藏24 h析晶，抽滤，用少量乙醚洗涤，40 ℃干燥即得。

　　2.2.2 因素与水平安排

　　参考文献〔7～9〕，丹皮酚和β?CD的比例、包合温度、搅拌时间为影响包合的主要因素，对每种因素各取3个水平，用L9(34)安排实验，因素水平表见表1。以包合物得率和包合率为综合指标进行工艺优化，综合评分中包合物得率和包合率的权重系数分别定为0.2和0.8〔9〕。按“2.2.1”项进行9组实验，正交实验结果及方差分析表见表2～3。表1 制备丹皮酚β?CD包合物因素水平（略）表2 正交实验设计表及实验结果（略）表3 方差分析表（略）

从正交实验结果可以看出，由直观分析和方差分析可见，因素A即丹皮酚与β?CD的比例对实验结果影响最大，影响丹皮酚包合的顺序为：投药比例＞包合温度＞搅拌时间。最佳包合工艺条件确定为：投药比例为1∶12，包合温度为50 ℃，搅拌时间为1h。

　　2.2.3 放大实验用优选的饱和水溶液法制备的3批产品含药量（8.64±0.13）%,包合率为（94.34±1.57）%，收得率为（82.22±0.28）%（n=3），说明本工艺稳定可行。