青藤碱对大鼠心脏移植排斥反应期间ICAM(一)
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作者：杨帆, 季刚, 陈彦彬, 王为忠
【关键词】 心脏移植;,青藤碱;,移植物排斥;,大鼠
The effects of sinomenine on the expresssion of ICAM1 and IL2 during the rejection of rat cardiac allograft
[Abstract] AIM: To observe the pathological characteristics of the rejection of rat cardiac allograft, study the effects and mechanisms of sinomenine on the rejection of rat cardiac allograft. METHODS: The rat model of heterotopic cardiac allograft was established. The rats were randomly divided into four groups: Group A(control group of healthy SD rats), Group B (cardiac allograft of SD to SD rats), Group C (cardiac allograft of SD to Wistar rats) and Group D (sinomenine treated group of cardiac allograft of SD to Wistar rats). ELISA and immunohistochemical staining were carried out to estimate the expression level of IL2 and ICAM1 in the grafts. RESULTS: Little ICAM1 and IL2 was observed in both Group A and Group B and the infiltration of lymphocytes was not so obvious. In group C, ICAM1 and IL2 were increased significantly and the infiltration of lymphocytes was obviously. In group D, inflammatory reaction and infiltration of lymphocytes were much less than those in group C, and ICAM1 and IL2 is expressed weakly. CONCLUSION: The expression level of ICAM1 and IL2 was relevant to the ourrence and development of graft rejection. Sinomenine could obviously reduce the expression of intercellular adhesion molecule and the infiltration of lymphocytes in the grafts and prolong grafts survival significantly.
[Keywords]heart transplantation; sinomenine; graft rejection; rat
[摘 要] 目的: 观察大鼠同种异位心脏移植排斥反应期间的病理特征, 探讨青藤碱对大鼠心脏移植排斥反应的影响及其发生机制。方法: SD 健康大鼠为供体, Wistar大鼠为受体, 建立大鼠异位心脏移植模型。实验分4组: A组为健康SD大鼠心脏作对照组, B组为SD 大鼠到SD 大鼠的同基因移植组, C组为SD大鼠到Wistar大鼠异基因移植组, D组为清藤碱治疗组。以ELISA、 免疫组织化学检测移植心组织中IL2和ICAM1的表达。结果: A、 B组未见排斥反应发生, 心脏组织中的ICAM1和IL2表达水平很低; C组有明显的炎症反应并见大量淋巴细胞浸润, 组织中ICAM1和IL2的表达水平明显升高(P005); D组炎症反应有所减轻, 同时少有淋巴细胞浸润; 组织仅微弱表达ICAM1和IL2。结论: 移植心脏ICAM1和IL2的表达水平与排斥反应的发生和发展有关, 青藤碱能显著抑制移植心ICAM1和IL2的表达和淋巴细胞的浸润, 减轻排斥反应, 明显延长移植物的存活。
[关键词]心脏移植; 青藤碱; 移植物排斥; 大鼠
青藤碱(sinomenine, SIN)是从中药青风藤中提取的一种单体生物碱, 具有抗炎、 抗风湿、 免疫抑制、 镇痛、 镇静等多方面的药理作用[1], 临床用于治疗类风湿性关节炎等身免疫性疾病疗效较好, 且副作用小[2]。为了进一步证实SIN的免疫抑制作用, 探讨SIN 免疫抑制作用机制, 为SIN的深层次开发及在器官移植免疫抑制治疗上的应用提供理论依据, 以期SIN 的使用减少CsA 的用量而减轻其毒副作用。我们通过建立大鼠心脏移植模型, 研究SIN 对移植心脏影响及机制, 为青藤碱深层次开发应用提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 材料 健康雄性SD大鼠(质量250～280 g)30只, 为心脏移植供体; 健康雄性Wistar大鼠(质量230～250 g)30只, 为心脏移植供体, 均购自第四军医大学实验动物中心。青藤碱盐酸盐粉剂, 购自正清股份有限公司; 检测IL2的ELISA试剂盒购于美国Biasouse公司; ICAM1免疫组化试剂盒购于北京中山公司。
1.2 方法
1.2.1 大鼠心脏移植急性排斥反应模型的建立 SD大鼠作为移植心脏供者, Wistar大鼠为受体参照Ono等[3]的方法, 并加以改进。供体麻醉后, 剪开胸腔, 迅速游离升主动脉及肺动脉, 并将之分别剪断, 其余与心脏相连的组织作一束结扎。取下供心后迅速置入4℃冷盐水中备移植。受体麻醉后开腹, 采取腹腔内异位心脏移植法。于肾动、 静脉下方将供心升主动脉对受体腹主动脉、 供心肺动脉对受体下腔静脉, 用110 显微缝线作端侧连续缝合。缝合完毕开放阻断钳, 移植心即刻恢复跳动。移植术后观察可经腹部扪摸心搏动, 确定移植心是否存活。饲养, 环境温度控制在22～25℃, 自由饮水。
1.2.2 实验分组 健康SD大鼠心脏作A组（对照组）, 给予普通饲料喂养; 移植成功的心脏移植受者鼠; 按随机原则分成3组, B组（SD大鼠到SD大鼠的同基因移植组）, 术后3 d予以氨苄青霉素200 mg/kg, iv, 1次/d; C组（SD大鼠到Wistar 大鼠异基因移植组; 术后处理同B组; D组（行不同品系心脏移植SD→Wistar）, 术后3 d予以氨苄青霉素200 mg/kg, iv, 1次/d+青藤碱30 mg/(kg?d), iv, 1次/d。
1.2.3 移植心搏动强度观察 术后每天腹部触诊, 判定移植心搏动强度。将移植心搏动强度分为5 级: Ⅰ级为移植心无搏动; Ⅱ级为移植心有微弱搏动; Ⅲ级为移植心搏动弱, 需稍用力方可触及; Ⅳ级为移植心搏动较强, 轻触腹部即可触及; Ⅴ级为移植心搏动强, 将鼠置于仰卧位即可见心脏搏动。
1.2.4 细胞因子的测定及移植鼠存活时间的测定 术后第3、 5、 7天, 从每组中随机抽取9只受体鼠采血2 mL。第7天处死移植鼠取移植心, 甲醛固定, 送病理检查。另取移植心脏组织快速冷冻后切片, 以免疫组化检测ICAM1的表达。ELISA法检测血清中的IL2, 具体操作按试剂盒说明书的实验操作流程进行。每组余下的6只受体鼠继续饲养, 观察生存时间。