归元创疗汤剂对创伤大鼠血浆内毒素及二胺氧化酶的影响(一)
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【摘要】 目的：通过中药方剂归元创疗汤对闭合性创伤大鼠模型的治疗，研究中药对血浆内毒素及二胺氧化酶的影响。方法：Wistar 大鼠 54 只，随机分成：正常组、中药组、对照组，其中中药组和对照组为创伤模型，分别给大鼠予灌胃归元创疗汤或生理盐水治疗，在不同时段进行血浆内毒素以及二胺氧化酶测定。结果：创伤大鼠的血浆内毒素及二胺氧化 酶明显高于正常大鼠，但中药组大鼠的血浆内毒素及二胺氧化酶低于对照组。结论：归元创疗方剂在早期创伤治疗中，具有保护胃肠黏膜屏障、抑制细菌内毒素移位作用，可减轻炎症反应。
【关键词】 创伤大鼠；归元创疗汤；内毒素；二胺氧化酶
〔Abstract〕 Objective Therapy of rats suffered from closed trauma with Guiyuan Chuangliao Decoction, to study the anti-inflammatory effects and mechanism of Chinese Medicine. Methods 54 Wistar rats were divided into three groups at random: normal group with no trauma and therapy; Chinese medicine group with trauma received gastric infusion of Guiyuan Chuangliao Decoction; Control group with trauma received gastric infusion of saline. Other measure was pletely identical in last two groups. Levels of endotoxin and the activity of diamine oxidase (DAO) in the plasma were measured in order to determine the effect of Guiyuan Chuangliao Decoction. Results The levels of plasma endotoxin and DAO in traumatic rats were significantly higher than those of normal group. The levels of plasma endotoxin and activity of DAO were significantly lower in Chinese medicine group than those in control group. Conclusion These results indicated that Guiyuan Chuangliao Decoction taken orally can abate the degree of intestine injury, restrain the endotoxin and pathogenic bacteria to translocate into systemic ans and systemic circulation, may lessen the systemic inflammatory response.
〔Key Words〕 Traumatized rat; Guiyuan Chuangliao Decoction; Endotoxin; Diamine oxidase (DAO)
自上世纪 80 年代以来，人们注意到机体最大的细菌及毒素贮库――肠道可能是原因不明感染的“策源地”，肠道细菌和内毒素移位所致的肠源性感染与严重创伤等应激后发生的脓毒症、多器官功能障碍密切相关。目前认为：胃肠道是脓毒症和多器官功能障碍综合征的启动机[1]。本研究以创伤大鼠为模型，观察归元创疗汤在创伤早期通过改善和保护胃肠黏膜、抑制细菌内毒素移位，达到对机体保护作用。
1 材料和方法
1.1 实验动物及分组 健康 Wistar 大鼠 54 只，随机分成 3 组：正常组 6 只，对照组 24 只，中药组24 只。对照组和中药组大鼠均为创伤大鼠。
1.2 药物 归元创疗汤：该方剂以小承气汤枳实、厚朴、大黄为主方，辅以党参、黄芪、当归等，用蒸馏水将中药洗净，浸泡 30 min 后，加蒸馏水水煮 3 次，由我院药剂室制成 200 mL 浓缩煎剂，经过滤和高压灭菌后 4℃ 分装保存。
1.3 闭合性创伤大鼠模型制备 大鼠创伤模型参照 Schirmer 等所述的方法[2]。氯胺酮腹腔注射麻醉，用钝器造成大鼠双侧股骨中部闭合性骨折伴周围软组织损伤。
1.4 灌胃疗法 大鼠创伤模型制备后，分别在乙醚麻醉下对创伤大鼠插胃管，中药组大鼠灌注中药 5 mL/次，而对照组灌注生理盐水 5 mL/次，创伤模型完成后即给第 1 次灌胃（不再进行乙醚麻醉），以后间隔 6 h 灌药 1 次：创伤后 6、12、18、24、30、36、42 h 等准确时间内在乙醚麻醉下定时灌注。
1.5 标本采集和保存方法 正常组大鼠在氯胺酮麻醉、无菌操作下打开腹腔采集下腔静脉血 4 mL，采血时注意压力勿使红细胞破裂引起溶血，置无热原抗凝采血管，4℃冰箱静置 1 h 后，3 000 r/min 离心 10 min，所得血浆分装于无菌空安瓿，置 - 20℃ 冰箱保存待检。中药组和对照组于模型制成后 12 h、24 h、36 h、48 h 共 4 个时相点，分批按上述方法取得血浆待检。每一时相点动物数均为 6 只。
1.6 血浆内毒素含量测定 试剂采用湛江安度斯公司提供的鲎试剂，内毒素标准品和稀释剂。采用动态浊度法，严格按无菌操作，相关试管为无热原试管。先将标准内毒素稀释后建立标准曲线，取0.1 mL 血浆经稀释剂 -Ⅰ稀释加热、加入鲎试剂在EDS-99 内毒素定量检测仪上反应 3 600 s 进行检测。
血浆二胺氧化酶活性测定：试剂采用 Sigma 公司提供的邻芳胺（o-dianisidine）、盐酸腐胺（cadaverine dihydrochoride）、二胺氧化酶标准品（diamine oxidase）；辣根过氧化物酶和磷酸缓冲液为国产试剂。应用 722 s 分光光度仪检测。波长为436 nm。按黎君友等[3]的测定二胺氧化酶的改良法操作。
1.7 统计学方法 所有实验数据采用均数±标准差表示（x±s）。使用 SPSS 12.0 软件进行随机独立样本 t 检验或单因素方差分析的 LSD 多重比较分析。P 0.05 表示差异显著，P 0.01 表示差异非常显著。