甘草酸防治小鼠哮喘的作用及其免疫学机理探讨(一)

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【关键词】 甘草酸；,,支气管哮喘；,,免疫调节

　　摘要：目的观察甘草酸对小鼠哮喘的防治作用及对哮喘小鼠的血清IgE和IL4的影响。 方法建立小鼠哮喘模型, 观察甘草酸对小鼠哮喘模型及哮喘小鼠血清IgE和IL4影响。 结果甘草酸治疗后与哮喘组小鼠相比较小鼠肺组织的炎症病理变化明显减轻, 血清IgE和IL4的水平均降低。结论 甘草酸具有免疫抑制作用, 可能通过调节机体的免疫功能，而发挥其抗支气管哮喘免疫炎症反应。

　　关键词：甘草酸； 支气管哮喘； 免疫调节

　　Effect of Glycyrrhizin on Mice Model of Bronchial Asthma and Immunology Mechanism

　　Abstract：ObjectiveTo explore the effect of glycyrrhizin on mice model of bronchial asthma and serum IgE and IL4 . MethodsThe mice model of bronchial asthma was built up. The effect of glycyrrhizin on mice model of bronchial asthma were observed, and the level of serum IgE and IL4 were tested. Resultspared with the model group, decreased in the group of glycyrrhizln inflammatary cells infiltration in pulmonary tissue slices of tiny bronchial wall and serum IgE and IL4 level.ConclusionGlycyrrhizin have immunosuppressive action, and can inhibit bronchial asthma immuno-inflammation by regulating anism immune function.

　　Key words：Glycyrrhizin; Bronchial asthma; Immunological regulation

　　甘草酸来源于中药甘草，是甘草的主要活性成分，已有报道证明甘草酸具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗变态反应、免疫调节等作用，并具有安全无毒的特点〔1〕。甘草酸可显著抑制抗原提呈细胞对T细胞的过度激活作用，抑制由TNFα介导的细胞免疫作用，调节T细胞释放细胞因子，使Th1/Th2 保持平衡，从而调节免疫反应〔2〕。甘草酸在结构上与皮质激素相似，在体内可延长或增强泼尼松的作用，研究证明甘草是通过刺激下丘脑垂体肾上腺皮质轴发挥其皮质激素样作用〔3〕。甘草提取物甘草酸胺对超敏反应中的免疫亢进, 如IgE，IgA和IgM等抗体的生成, 免疫复合物的产生及活化淋巴细胞细胞因子的分泌等均有调节作用〔4〕。甘草酸则对免疫调节介质的产生具有一定作用，并具有较强的补体抑制作用。甘草酸是一种有效的生物应答修饰剂，在增强机体免疫功能的同时抑制变态反应的发生〔5〕。临床上将甘草酸胺氯喘用于哮喘病的治疗。为了深入了解甘草酸是否有防治支气管哮喘作用，并探讨其平喘的免疫药理作用与IgE和IL4 之间的关系，本研究设计用卵蛋白建立小鼠哮喘模型，以泼尼松为阳性对照药，对甘草酸的平喘作用进行深入的研究。现报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物及分组8周龄昆明种小鼠40只，雌性，体重(25±5)g。按随机原则分4组，每组10只，分别为对照组、哮喘组、强的松组、甘草酸组。

　　1.2 试剂和仪器卵蛋白（OVA，V级，美国Sigma），甘草酸：Adrich 公司, IgE和IL4 ELISA试剂盒（深圳晶美生物工程有限公司），SC-A型超声雾化器（辽宁鞍山医疗电仪器厂）、HM202型电子天平（日本 Tokoy A&D 公司制造）、酶标仪(美国Bio Rad450) 。

　　1.3 小鼠过敏性哮喘动物模型的建立小鼠于第1，7，14天给予腹腔注射10μg卵蛋白+2mg氢氧化铝凝胶，用生理盐水稀释到0.5 ml。第21天开始用1%卵蛋白雾化激发，通过人工调节雾化量使雾化吸入箱里卵蛋白颗粒浓度维持在10~20 mg/m3之间, 1次/d，30 min，连续7 d。对照组小鼠用生理盐水腹腔注射和雾化。每次雾化前泼尼松组小鼠按1.5 mg/kg剂量给予泼尼松0.5 ml /只灌胃，甘草酸组小鼠给予50 mg/kg甘草酸0.5 ml/只灌胃, 另两组小鼠给予 0.5 ml/只生理盐水灌胃。

　　1.4 标本的收集最后1次雾化吸入后6 h，小鼠眼球取血, 收集血清, 70℃保存备用。取左上肺HE染色，用作常规组织学检查。

　　1.5 对小鼠免疫器官的影响取小鼠胸腺和脾脏称重, 并计算脾指数和胸腺指数。脾或胸腺指数 = 脾重或胸腺重(mg)/体重(g) 。

　　1.6 ELISA检测血清特异性lgE将小鼠血清100 μl分别加入待测品孔每孔中, 将反应板充分混匀后置37℃ 60 min, 用洗涤液将反应板充分洗涤4~6次，向滤纸上印干。每孔加酶标抗体工作液100 μl, 将反应板置37℃ 60 min。再次洗板同前。每孔加入底物工作液100 μl，置37 ℃暗处反应15~20 min，每孔加入1滴终止液混匀，在492 nm处测吸光值。

　　1.7 ELISA检测白细胞介素4（IL4）分别将小鼠血清或不同浓度标准品（100 μl/孔）加入相应孔中，空白孔除外。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育90 min，洗涤4次。除空白孔外，加入生物素化抗体工作液（100 μl/孔），37℃孵育60 min，洗涤4次，除空白孔外，加入酶结合物工作液（100 μl/孔），37℃孵育30 min，洗涤4次。加入显色剂100 μl/孔避光37℃孵育20 min，加入终止液 100 μl/孔混匀，在450 nm处测吸光值。

　　1.8 统计分析　实验结果以±ｓ表示,采用ＳＰＳＳ10. 0统计分析软件计算相应的统计学参数。