川楝子致小鼠肝毒性时效、量效关系研究(一)
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作者：齐双岩 熊彦红 金若敏
【摘要】 目的研究川楝子致小鼠肝毒性的时效、量效关系。方法小鼠灌服不同剂量川楝子，测定其LD50。另取小鼠按不同时间点或不同剂量分组，检查血清ALT，AST，计算肝、脾、胸腺脏器指数，并观察肝组织形态变化。结果小鼠灌服川楝子的LD50为200 g・kg-1。ALT，AST在给药后1 h达到高峰，24 h可恢复近正常值。与正常组比较，川楝子81，166 g/kg剂量组对肝组织产生明显损伤，且随着剂量增大，ALT，AST升高显著(P0.05或P0.01)。结论小鼠单次灌服一定剂量川楝子可造成急性肝损伤甚至死亡，并显示有毒性时效、量效关系。
【关键词】 川楝子 小鼠 肝毒性
川楝子Fructus Toosendan为临床常用药。《中国药典》2005年版所载川楝子为楝科植物川楝Melia toosendan Sieb. et Zu.的干燥成熟果实，性味苦寒，有小毒，归肝、小肠、膀胱经，具有疏肝泄热、行气止痛、杀虫等功效，临床用于治疗胸胁、脘腹胀痛、疝气痛、虫积腹痛。有关川楝子毒性的记载首见于《名医别录》。为进一步明确川楝子的肝毒性特点，本实验就小鼠单次灌服川楝子后肝毒性的时效与量效关系进行了初步研究。
1 材料与仪器
1.1 动物KM小鼠，清洁级，18～20 g，雌雄各半，上海斯莱克实验动物有限公司提供，合格证号SCXK(沪)2003－0003。饲养于上海中医药大学实验动物中心。
1.2 药物川楝子原药材购于上海养和堂张江分店，四川产，批号051216，经上海中医药大学中药学院赵志礼教授鉴定系为楝科植物川楝Melia toosendan Sieb. et Zu.的干燥成熟果实。
川楝子药液的制备（水提醇沉）：将药物粉碎呈颗粒状，水煎3次。合并3次药液，过滤，浓缩，加乙醇，回收乙醇。将上述水提醇沉液浓缩至浓度为10 g/ml，置冰箱，保存备用。临用前，用蒸馏水分别配成所需浓度的药液（以下简称“川楝子”）。
1.3 试剂丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂（批号060339）；天冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂（批号051210，均由上海丰汇医学科技有限公司提供）。
1.4 仪器AR2130电子天平（奥豪斯国际贸易上海有限公司）；全自动生化分析仪HITACHI7020（日本HITACHI公司）；系统显微镜BX51/BX52（日本奥林巴斯光学株式会社）；全能型脱水机（徕卡公司）。
2 方法
2.1 口服半数致死量(LD50)测定取小鼠，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。在168～232 g/kg之间按照等比级数(0.9)确定4个给药剂量。各给药组按0.4 ml/10 g灌胃1次，正常组同时灌服等容量蒸馏水。连续观察7 d。观察并记录给药后的一般状况和死亡情况；死亡小鼠解剖后肉眼观察各脏器有无异常变化。
2.2 口服“毒性时效”关系研究取小鼠，雌雄各半，随机分为8组，按处理时间点依次为0（即正常组），1，2，6，12，24，48，72 h组。按0.4 ml/10 g灌胃1次，0 h组小鼠灌服蒸馏水，其余各组灌服188 g/kg川楝子。于相应时间点称量小鼠体重，摘眼球取血，血3 000 r/min离心10 min，取血清，以全自动生化分析仪测定血清ALT，AST。摘取小鼠肝脏、脾脏、胸腺，称重并计算脏器指数〔4〕。另取一部分肝组织，常规HE染色，光学显微镜下观察其组织形态学变化。对肝组织形态进行病理分级、积分〔1〕：肝组织结构正常，无明显变性、坏死及炎症细胞浸润，0分；肝小叶结构尚正常，可见明显的混浊肿胀、气球样变或脂肪变性，散在点状坏死(＋)，1分；肝小叶结构不清，可见明显的灶状坏死，伴有炎症细胞浸润(＋＋)，2分；肝小叶结构不清、可见明显的片状坏死，伴有炎症细胞浸润(+++)，3分；坏死细胞弥漫性存在于肝小叶中央，层次较多，伴有炎症细胞浸润(++++)，4分。
2.3 口服“毒性量效”关系研究取小鼠，雌雄各半，随机分为6组，即正常组和川楝子5个剂量组。按0.4 ml/10 g灌胃1次，正常组灌服蒸馏水，川楝子各剂量组分别灌服166，81，57，40，28 g/kg川楝子。1 h后，按“2.2”方法测定血清ALT，AST，计算脏器指数，另取一部分肝组织，用于观察组织形态学变化。
2.4 统计方法使用SPSS 13.0统计软件Probit法计算LD50、LD99和LD1。Radit法对肝组织病理积分的数据进行统计分析。计量资料采用±s表示，使用SPSS 13.0软件进行统计处理，两组间比较采用t检验法，多组间比较采用单因素方差分析法。P0.05或P0.01为差异有显著性。
3 结果
3.1 口服LD50
3.1.1 给药后的一般状况部分动物在给药后0.5～1 h出现腹腔震颤，活动减少，身体略发凉，气息微弱。继而，出现异常反应的小鼠部分死亡，死亡时间集中在给药后的4 h内。死亡小鼠肝脏肉眼检查可见有不同程度的颜色变深、表面粗糙等，胃肠道内容物充盈，肠壁充血，其余脏器未见有异常改变。存活的动物两便增多。给药12 h后部分有异常反应的小鼠可逐渐恢复正常。