分光光度法测定夏枯草中总黄酮的含量(一)

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作者：邓斌，蒋刚彪，黄红英，陈六平

【摘要】 　　目的研究可见光及紫外光分光光度法测定夏枯草中总黄酮含量的方法。方法可见光分光光度法是以芦丁为参照品,硝酸铝作显色剂，在510 nm波长处测定总黄酮含量；紫外光分光光度法是以芦丁为参照品，在357nm波长处测定总黄酮含量。结果可见光法平均回收率为97.76%，紫外光法为99.10%，前者的RSD值是1.02%，后者的RSD值是0.88%。结论紫外分光光度法具有简便、快速、准确、经济的优点，是一种较理想的测定夏枯草中总黄酮含量的方法。

【关键词】 夏枯草；总黄酮；分光光度法
Abstract：ObjectiveTo determine the total flavone content in Prunella vulgaris L. by VIS and UV Spectrophotometry.MethodsThe control sample of VIS Spectrophotometry was rutin,the revealing agent was Al(NO3)3 and the analyzed wavelength was 510 nm.The control sample of UV Spectrophotometry was rutin and the analyzed wavelength was 357 nm.ResultsThe average recoveries of VIS and UV Spectrophotometry were 97.76% and 99.10%,the RSD were 1.02% and 0.88% respectively. ConclusionUV spectrophotometry is simple, rapid, aurate, economical and is suitable for content determination of total flavones in Prunella vulgaris L..

　　Key words：Prunella vulgaris L.; Total flavones; Spectrophotometry

中药夏枯草为唇形科夏枯草属植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，全国大部分地区均有分布，易栽培，资源丰富。主要含有三萜及其苷类、苯丙素类、甾醇及其苷类、黄酮类、香豆素、有机酸、挥发油及其糖类等。全草均可入药，其味辛、微苦，性微寒，具有清火、明目、散结、消肿之功效。常用于治疗头痛、眩晕、瘰疬、瘿瘤、乳痈肿痛、甲状腺肿大、淋巴结结核、乳腺增生症等疾病〔1〕。目前，有关植物中黄酮类物质的测定方法主要有分光光度法和高效液相色谱法等〔2～4〕，其测定夏枯草总黄酮含量的方法还未见报道。本文分别采用可见光和紫外光分光光度法测定夏枯草中总黄酮的含量，并对两种方法进行了比较，拟寻找出一种准确而简便的测定夏枯草中总黄酮含量的方法，为合理科学开发这一宝贵的中药资源，深入研究其确切的药理作用提供可靠的理论和实验依据。

　　1 器材与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 试剂与原料

　　无水甲醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等试剂均为分析纯；芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：0080-9705)；夏枯草药材购于广州市药材公司（由广东药学院生药研究室鉴定），经粉碎后过60目筛，放入60～80℃烘箱中干燥12h后，稍加冷却，放入干燥器中备用。

　　1.1.2 仪器与设备

　　上海惠普6010型紫外-可见分光光度计；上海二分7230G可见光分光光度计；北京赛多利斯电子分析天平；索氏提取器；F120型粉碎机；RE52286A型旋转蒸发器等。

　　1.2 方法

　　1.2.1 药液的制备

　　精确称取夏枯草干粉2.500 0 g置于索氏提取器中，石油醚回流以除去试样中的脂类及色素，至提取管中呈无色。将石油醚提取后的残渣，用200 ml无水甲醇，抽提至无色。提取液全部转移到250 ml容量瓶中，用无水甲醇定容作为实验用液，待测。

　　1.2.2 可见光分光光度法标准曲线的绘制〔5〕精确称取经120℃下干燥至恒重的芦丁对照品10.0 mg，用无水甲醇溶解，转移至100 ml容量瓶中，用无水甲醇定容，摇匀，即得芦丁对照品溶液(每毫升溶液含芦丁对照品0.1 mg)。

　　准确吸取0.1mg/ml的芦丁对照品溶液0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00，7.00，8.00 ml，分别置于25 ml容量瓶中，各加甲醇至10 ml，分别加5%亚硝酸钠溶液1.00 ml，摇匀，放置6 min后分别加10%硝酸铝溶液1.00 ml，摇匀，放置6 min，再分别加1%氢氧化钠溶液10.00 ml，并用甲醇定容至刻度，摇匀，放置15 min后，以无水甲醇溶液为空白液，在波长510 nm处测各溶液的吸光度，得回归方程为：A=0.020 93C－0.012 1〔A为吸光度，C为浓度(mg/L）〕，相关系数r=0.999 6。表明芦丁对照品溶液浓度处于2～32 mg/L范围内时，吸光度与其浓度间呈现出良好的线性关系。

　　1.2.3 可见光分光光度法回收率实验精确称取6份已知总黄酮含量的夏枯草粉末2.500 g，加入一定量的芦丁对照品，按照“1.2.1”项所述制得实验液，按照“1.2.2”项所述显色并测定吸光度，由回归方程计算总黄酮含量，按下式计算回收率。

　　回收率（%）=混合后实测总黄酮含量－样品中总黄酮的含量芦丁标准加入量×100% （1）

　　1.2.4 可见光分光光度法样品的总黄酮含量测定分别准确吸取1.00 ml实验用液入25 ml容量瓶中，按照“1.2.2”项所述方法显色后，在510 nm波长处测定吸光度A，由回归方程计算出样品中总黄酮的含量。